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酶联免疫吸附试验

将抗体的特异性与某种检测系统相结合——以正确的方式——可以产生一种最强大、最可靠的技术来检测或测量生物样品中的分析物（配体）：酶联免疫吸附剂化验，或 ELISA。

在最基本的情况下，ELISA 测量信号，通常由与切割底物分子的检测抗体偶联的酶产生。存在的配体越多，与其结合的抗体就越多，产生的信号也就越多。

虽然原理很简单，但开发它们可能非常困难且耗时；选择正确的试剂、优化包被/检测抗体浓度、孵育时间、洗涤步骤、建立测定的动态范围和不同样品基质的影响。

这就是为什么我们一直在努力寻找越来越多的供应商，涵盖范围更广的抗原/靶点，提供简单的 ELISA 和所有需要的试剂，随时可用。

供应商

ELISA 的类型

无论是用于定性、定量还是半定量测量分析物——配体——所有 ELISA 都使用抗体来捕获或检测（或两者）感兴趣的分析物。但是有不同的方法来解决这个问题。

一般而言，对于所有 ELISA，信号都是使用连接到检测抗体的报告分子或酶产生的。大多数 ELISA 倾向于使用辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联的检测抗体，允许使用多种不同的底物来产生信号，例如 TMB 或 ABTS，但还有许多其他选项可用。

直接ELISA

将含有感兴趣的分析物（抗原）的样品添加到板中并使其吸附到板表面。然后洗涤板以去除未结合的样品，并将对感兴趣的抗原具有特异性的检测抗体添加到板中。检测抗体直接与报告分子或 HRP 等酶结合，从而产生信号。

间接ELISA

与直接 ELISA 类似，只是检测抗体不直接与报告分子偶联。相反，结合检测抗体的标记二抗用于间接检测感兴趣的抗原或蛋白质的存在。

竞争性 ELISA

样品在固定浓度的感兴趣分析物标记形式的存在下被包含。然后样品中的分析物竞争结合固定量的检测抗体。随着样品中分析物水平的增加，这减少了固定浓度的标记分析物的可用结合位点，因此较低的测定信号指示样品中较高量的分析物。

夹心ELISA

夹心 ELISA 通常被认为是最可靠的 ELISA 形式之一，使用前只需很少或不需要样品制备。典型的夹心 ELISA 使用预先包被在微孔板上的“捕获”抗体，添加样品并捕获分析物。然后洗涤板以去除未结合的样品成分，并添加标记的检测抗体（通常但不一定是多克隆抗体），将分析物“夹在”这两种抗体之间。

软件

大多数实验室将拥有运行 ELISA 所需的一切，并且大多数酶标仪将配备某种分析软件，但是，如果您没有合适的分析软件并且正在寻找一些我们会推荐 either SoftMax Pro, or Masterplex 读卡器.这两个包都有可选的安全和验证模块，供受监管的实验室使用。

如果您不需要足够频繁地运行 ELISA 来购买新的软件包，也可以使用一些基于 Web 的免费选项，例如这里 and 这里.

为您的数据拟合正确的曲线模型可能是使用定量 ELISA 分析和获得可靠、可重复结果的最重要步骤之一。一般来说，ELISA 校准曲线会给出描述 S 形（S 形）或对数曲线的数据点。两种类型的曲线通常最好使用四参数或五参数逻辑曲线拟合来描述，尽管制造商通常会推荐每个试剂盒的适当曲线拟合。

执行 ELISA 的技巧

1) 在开始之前阅读制造商的说明。

假设此 ELISA 的方法与另一个类似，很容易被发现。这会导致两件事之一，当你意识到时在实验室中疯狂地跑来跑去，或者在一天结束时得到糟糕的数据和失败的分析。

2) 在添加样品之前准备一个板计划。

不要依赖你的记忆！许多化验不得不重复进行，仅仅是因为人们以后无法确定哪个样本是哪个样本。许多试剂盒手册包括板图，因此您可以使用它并将试剂盒手册钉在您的实验室书籍中，这也是记录试剂盒批号的好地方。不要忘记包括样品稀释液（如果有）。

3) 最佳做法是一式两份分析样品

一般来说，要对您的结果有信心，重复是最好的。折扣和重新分析具有高 %CV 的样本（许多实验室设置了大约 20-30% 的阈值）。

4) 使用标准的“正向”移液来准备样品和其他试剂

反向移液适用于向板中添加检测抗体或底物等试剂。如果可能，在向整个板添加单一试剂时使用多通道。

5) 将样品和试剂添加到孔的两侧

为了避免接触化验板的底部和干扰/刮擦任何涂层试剂，这可能最终会给您带来奇怪的结果，并保持一致性。

6）“停止”后尽快阅读盘子

TMB 的反应产物会从溶液中沉淀出来，导致板底出现可见的深黑色/棕色斑点，有时还会出现异常结果。

我们致力于提供英国最好的试剂和服务。如果您有任何问题或意见，请留下您的联系方式和询价这里我们会在 24 小时内回复。